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原代细胞的制备及培养

时间：2016-05-01

原代细胞的制备及培养

定义
原代细胞（primary culture cell）是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。

一般培养方法
1、组织块培养法
1）按照前述方法取材，将组织剪成或切成1mm3大小的小块，并加入少许培养基使组织湿润。
2）将小块均匀涂布于瓶壁，每小块间距0.2 cm～0.5cm，一般在25mL培养瓶（底面积为17.5cm2）可接种20～30小块为宜，小块放置后，轻轻翻转培养瓶，使瓶底朝上，然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞，将瓶倾斜放置在37℃温箱内。
3）培养2～4小时，待小块贴附后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养，动作要轻，严禁摇动和来回振荡，以防由于冲动而使小块漂起而造成培养失败，若组织块不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多，以保持组织块湿润即可，培养24小时后再补液，培养初期移动和观察时要轻拿轻放，开始几天尽量不去搬动，以利贴壁和生长，培养3～5天时可换液，一方面补充营养，一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。

2、消化培养法
该方法是采用前述的消化分散法，将妨碍细胞生长的细胞间质（包括基质、纤维等）去除，使细胞分散形成细胞悬液，然后分瓶培养。

3、悬浮细胞培养法
对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

服务特点
1、细胞传代代数低(一般4代)，细胞状态好，无污染；
2、可以提供多种原代培养的细胞。

客户须知
1、详细说明进行原代细胞培养的组织，并确定组织是由客户提供还是本公司提供；
2、尽可能提供该原代细胞的培养条件，或者由本公司摸索培养条件；
3、对于一些常见的原代培养组织，因为保存运输的不便可能会降低原代培养的成功率，建议客户选择由本公司提供相应的组织。

服务承诺
提供冻存或处于对数生长期的细胞株一瓶(细胞培养条件，图片)。